مگاکاریوسیت ها (MK)، سلول های هماتوپوئیتیکی (خون ساز) موجود در مغز استخوان هستند که مسئول تولید و آزاد سازی پلاکت ها به جریان خون می باشند. به دلیل فراوانی بسیار پایین (کمتر از 1%)، MK انسانی اغلب بایستی به منظور مطالعه مراحل تکوینشان یا برای تولید میزان کافی از آن ها برای مطالعات بیولوژیکی، کشت داده شوند.  در این مقاله، پروتکل کشت 14 روزه ای که منجر به تولید کارای MK و پلاکت ها از سلول های پروژنیتوری حاصل از خون بند ناف توضیح داده می شود. یک محیط عاری از سرم برای رشد سلول های CB همراه با مجموعه ای از سایتوکاین های مناسب که برای تمایز، تکثیر و بلوغ MK اختصاص یافتند، پیشنهاد شده است. روش هایی شامل آنالیزهای فلوسایتومتری، تخمین میزان پلاکت ها و MK و سنجش پروژنیتورهای MK نیز در این مقاله ارائه شدند.

Ex vivo differentiation of cord blood stem cells into megakaryocytes and platelets.

Pineault N, Robert A, Cortin V, Boyer L.

Source

Département de Recherche et Développement, Héma-Québec, Université Laval, Québec City, QC, Canada. nicolas.pineault@hema-quebec.qc.ca

Abstract

Megakaryocytes (MK) are hematopoietic cells present in the bone marrow that are responsible for the production and release of platelets in the circulation. Given their very low frequency (<1%), human MK often need to be derived in culture to study their development or to generate sufficient material for biological studies. This chapter describes a simplified 14-day culture protocol that efficiently leads to the production of MK and platelets from cord blood enriched progenitor cells. A serum-free medium is suggested for the growth of the CB cells together with an optimized cytokine cocktail developed specifically for MK differentiation, expansion, and maturation. Methodologies for flow cytometry analysis, MK and platelets estimation, and MK progenitor assay are also presented