ویرایش ژنومی موثر در سلول های بنیادی پرتوان القایی با استفاده از نوکلئازهای مهندسی شده درin vitro
تاریخ انتشار: یکشنبه 19 دی 1395
| امتیاز:
مهندسی های ژنومی دقیق، موجب پیشرفت سریع کاربرد تکنولوژی های سلول های بنیادی پرتوان القایی(iPSCs) برای مدل سازی in vitro بیماری های قلبی شده است. ویرایش ژنومی هدفمند با استفاده از نوکلئازهای مهندسی شده ابزار قوی است که می تواند برای ژنتیک معکوس، مهندسی ژنوم و آزمایشات هدفمند الحاق ترانس ژن ها برای انجام روشی دقیق و قابل پیش بینی استفاده شود. با این حال، نوترکیبی های همولوگ بواسطه نوکلئازها فرایندی ناکارامد است. در اینجا، ما تکوین یک روش بهینه سازی شده حاصل از ترکیب نوکلئازهای اختصاصی و سیستم ترانسپوزون piggyback را برای ویرایش ژنومی seamless در سلول های بنیادی پرتوان و با کارامدی و اطمینان بالا در آزمایشگاه را توصیف می کنیم.
Methods Mol Biol. 2017;1521:55-68.
Efficient Genome Editing in Induced Pluripotent Stem Cells with Engineered Nucleases In Vitro.
Termglinchan V1, Seeger T1, Chen C1, Wu JC1,2,3, Karakikes I4,5.
Abstract
Precision genome engineering is rapidly advancing the application of the induced pluripotent stem cells (iPSCs) technology for in vitro disease modeling of cardiovascular diseases. Targeted genome editing using engineered nucleases is a powerful tool that allows for reverse genetics, genome engineering, and targeted transgene integration experiments to be performed in a precise and predictable manner. However, nuclease-mediated homologous recombination is an inefficient process. Herein, we describe the development of an optimized method combining site-specific nucleases and the piggyBac transposon system for "seamless" genome editing in pluripotent stem cells with high efficiency and fidelity in vitro.
PMID: 27910041