انکوستاتین M در محیط William’s E برای شروع تمایز کبدی در سلول های بنیادی پرتوان القایی انسانی مناسب است
تاریخ انتشار: شنبه 12 فروردین 1396
| امتیاز:
William’s E(WE) یک محیط مناسب برای تمایز سلول های بنیادی پرتوان القایی انسانی(iPSC) به رده هپاتوسیتی است. هدف از مطالعه حاضر بررسی فاکتورهای رشد مختلف در توانایی شان برای پیشبرد تمایز هپاتوسیتی سلول های iPS در محیط WE بود. سلول های iPS201B7 انسانی در محیط WE کامل شده با فاکتورهای رشد کشت شدند و سطح بیان mRNA و فعالیت های پروموتوری آلفا فیتوپروتئین(AFP) و آلبومین بوسیله RT-PCR و سنجش لوسیفرازی سنجیده شد. علاوه براین آنالیزهای دوره ای بیان mRNAی AFP در سلول های 210B7 کشت شده در محیط WE کامل شده با انکوستاتین M صورت گرفت. نتایج نشان داد که سطح بیان mRNAی AFP به طور معناداری بوسیله اغلب فاکتورهای رشد تست شده به عنوان مکمل در محیط WE (به جز ال-ترانس اسید رتینوئیک) در مقایسه با سلول های کشت شده در ReproFF( محیطی که پرتوانی را حفظ می کند)، به طور قابل توجهی افزایش یافت. بیشترین افزایش بیان AFP mRNA بوسیله تحریک انکوستاتین M مشاهده شد. سطح بیان mRNAی آلبومین بوسیله ال-ترانس اسید رتینوئیک و مکمل انسولین-ترانسفرین-سلنیوم در محیط کشت WE در مقایسه با سلول های کشت شده در ReproFF افزایش یافت. مکمل انکوستاتین M به طور معناداری فعالیت پروموتور ژن AFP را افزایش داد اما هیچ کدام از فاکتورهای رشد تست شده فعالیت پروموتور ژن آلبومین را به طور قابل توجهی افزایش نداد. بوسیله آنالیزهای دوره ای(زمانی)، افزایش معنادار بیان AFP mRNA در روز ششم بعد از تحریک، در مقایسه با سلول های کشت شده در محیط WE به تنهایی مشاهده شد. در مجموع، مطالعه حاضر نشان می دهد که مکمل انکوستاتین M در محیط WE برای شروع تمایز هپاتوسیتی سلول های iPS کافی است.
Mol Med Rep. 2017 Mar 28. doi: 10.3892/mmr.2017.6406. [Epub ahead of print]
Oncostatin M in William's E medium is suitable for initiation of hepatocyte differentiation in human induced pluripotent stem cells.
Tomizawa M1, Shinozaki F2, Motoyoshi Y3, Sugiyama T4, Yamamoto S5, Ishige N6.
Abstract
William's E (WE) is a suitable medium for the differentiation of human induced pluripotent stem (iPS) cells to the hepatocyte lineage. The aim of the present study was to investigate various growth factors in their ability to promote hepatocyte differentiation of iPS cells in WE medium. Human iPS 201B7 cells were cultured in WE medium supplemented with growth factors, and mRNA expression levels and promoter activities of α‑fetoprotein (AFP) and albumin were examined by reverse transcription‑quantitative polymerase chain reaction and luciferase assay, respectively. In addition, time course analysis of AFP mRNA expression was performed in 201B7 cells cultured in WE medium supplemented with oncostatin M. The results demonstrated that mRNA expression levels of AFP were significantly elevated by most growth factors tested as supplements in WE medium, except all‑trans retinoic acid, compared with cells cultured in ReproFF (a medium that maintains pluripotency). The highest increase in AFP mRNA expression levels was observed by oncostatin M stimulation. Albumin mRNA expression levels were increased by all‑trans retinoic acid and insulin‑transferrin‑selenium supplementation in WE medium compared with cells cultured in ReproFF. Oncostatin M supplementation significantly stimulated the promoter activity of the AFP gene, but no growth factor tested significantly stimulated the promoter activity of the albumin gene. By time course analysis, significant increase of AFP mRNA expression was observed on the sixth day post‑stimulation, compared with cells cultured in WE medium alone. In conclusion, the present study demonstrated that oncostatin M supplementation in WE medium was sufficient to initiate hepatocyte differentiation in iPS cells.
PMID: 28358419