ویژگی های مفید سلول های استرومایی مزانشیمی تمایز نیافته و بافت چربی به عنوان منبعی در درمان بازسازی کننده کبدی در مدل جانوری هپاتیت فلومینانت حاد شدید مطالعه شد
تاریخ انتشار: چهارشنبه 23 فروردین 1396
| امتیاز:
اهداف:
بیماری های کبدی پیشرفته اغلب نیازمند پیوند کبدی هستند. سلول درمانی می تواند یک گزینه جایگزین باشد. این مطالعه در نظر دارد آنالیز کند که آیا سلول های استرومایی مزانشیمی تمایز نیافته(U-MSCs) یا سلول های شبه هپاتوسیت مشتق از MSCهای(DHLCs) مشتق از بافت چربی، خون بند ناف(UCB) و مغز استخوان(BM) بهتر کبد آسیب یافته را احیا می کنند یا خیر.
روش ها:
بافت چربی از لیپوآسپیره کردن، خوند بند ناف از بانک خون بند ناف و مغز استخوان از واحد پیوند مغز استخوان بدست آمد. بافت چربی(هضم کلاژنازی)، خون بند ناف و مغز استخوان(شیب فایکول) به مدت سه روز در محیط DMEMبا گلوکز کم کشت شدند. سلول های چسبنده کنده شده در پاساژ 4 به عنوان سلول های بنیادی مزانشیمی شناسایی شدند. پایداری ژنتیکی بوسیله میانگین فعالیت آنزیم تلومرازی و کاریوتیپ بررسی شد. پروتکل تمایز کبدی با استفاده از محیط DMEM، فاکتور رشد هپاتوسیتی، bFGF و نیکوتین آمید به مدت هفت روز کشت داده شدند؛ محیط بلوغ( انکوستاتین، دگزامتازون، انسولین، ترانسفرین و سلنیوم) به مدت 36 روز اضافه شد. آنالیزهای هپاتوژنز بوسیله استفاده از مورفولوژی و بیان ژن های آلبومین، AF، تیروزین آمینوترانسفراز و گلوتامین سنتتاز qRT-PCR در روزهای 9،18،25 و 36 انجام شد. عملکردی بدون از طریق تشخیص ذخیره گلیکوژن، جذب ایندوسینانین گرین و روش پیوند سنجیده شد. سلول های بنیادی مزانشیمی تمایز نیافته و DHLCs، 48 ساعت بعد از هپاتیت فلومینانت القا شده(تزریق درون صفاقی تتراکلرید کربن) در موش SCID/BALB-c تزریق شدند. آنالیزهای هیستوپاتولوژیک در روزهای 7 و 15 صورت گرفت. منشا انسانی شامل مارکرهای انسانی آلبومین و CK19 بود.
نتایج:
همه سلول های بنیادی به سلول های شبه کبدی تمایز یافتند، گلیکوژن ذخیره کردند و ایندوسیانین گرین جذب کردند. بیان ژن AT-MSC DHLC بیشتر با پروفایل تمایز کبدی طبیعی مطابق بود. سلول های بنیادی مزانشیمی خون بند ناف تکثیر ضعیفی داشت و استفاده از آن ها برای پیوند را مختل کرد. سلول های بنیادی مزانشیمی بافت چربی و مغز استخوان و DHLCها آسیب کبدی را به یک میزان بازسازی کردند. هپاتوسیت های بازسازی شده منشا انسانی نشان دادند.
بحث:
بافت چربی ممکن است منبعی از سلول های بنیادی مزانشیمی تمایز نیافته برای درمان های بازسازی کبدی باشد.
Cytotherapy. 2015 Aug;17(8):1052-65. doi: 10.1016/j.jcyt.2015.04.010.
Useful properties of undifferentiated mesenchymal stromal cells and adipose tissue as the source in liver-regenerative therapy studied in an animal model of severe acute fulminant hepatitis.
Manzini BM1, da Silva Santos Duarte A1, Sankaramanivel S2, Ramos AL2, Latuf-Filho P3, Escanhoela C4, Kharmandayan P5, Olalla Saad ST6, Boin I7, Malheiros Luzo ÂC8.
Abstract
BACKGROUND AIMS:
End-stage liver diseases frequently require liver transplantation. Cell therapy could be an alternative. This study aimed to analyze whether undifferentiated mesenchymal stromal cells (U-MSCs) or MSC-derived hepatocyte-like cells (DHLCs) from adipose tissue (AT), umbilical cord blood (UCB) and bone marrow (BM) would better restore damaged liver.
METHODS:
AT was obtained from lipo-aspiration, UCB from an Umbilical Cord Blood Bank and BM from a BM Transplantation Unit. AT (collagenase digestion), UCB and BM (Ficoll gradient) were cultured (Dulbecco's modified Eagle's medium, low glucose, FBS) for 3 days. Detached adherent cells, at passage 4, were characterized as MSCs. Genetic stability was investigated by means of telomerase enzyme activity and karyotype. Hepatocyte differentiation protocol was performed with the use of Dulbecco's modified Eagle's medium, hepatocyte growth factor, basic fibroblast growth factor and nicotinamide (7 days); maturation medium (oncostatin, dexamethasone, insulin, transferrin and selenium) was added at 36 days. Hepatogenesis analyses were performed by use of morphology and albumin, AF, tyrosine-aminotransferase and glutamine synthetase gene expression and quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction on days 9, 18, 25 and 36. Functionality was assessed through glycogen storage detection, indocyanine green absorption and transplantation procedure. U-MSCs and DHLCs were injected 48 h after induced fulminant hepatitis (intraperitoneal injection of carbon tetrachloride) in SCID/BALB-c mice. Histopathologic analyses were performed on days 7 and 15. Human origin included albumin and CK19 human markers.
RESULTS:
All MSCs differentiated into functional hepatocyte-like cells, stored glycogen and absorbed indocyanine green. AT-MSC DHLC gene expression was more consistent with a normal hepatogenic-differentiation profile. UCB-MSCs expanded weakly, impairing their use for the transplantation procedure. AT and BM U-MSCs and DHLCs regenerated liver injury equally. Regenerated hepatocytes exhibited human origin.
CONCLUSIONS:
AT might be the source and U-MSCS the stem cells useful for liver-regenerative therapy.
PMID: 26139545