تولید و ویژگی یابی رده iPSC از سلول های CD34+ جداسازی شده از خون بند ناف مربوط به نژاد هندی
تاریخ انتشار: یکشنبه 03 اردیبهشت 1396
| امتیاز:
ما در این جا بازبرنامه ریزی سلول های CD34+ جداسازی شده از خون بند ناف بدست آمده بعد از زایمان طبیعی کودکان هندی زنان سالم را توصیف کرده ایم. سلول ها با استفاده از وکتورهای اپی زومال بیان کننده Oct4، Sox2، L-Myc، Klf4، Lin28 و p53DD(موتاسیون منفی درp53)، نوکلئوفکت شدند. کلونی ها بوسیله رنگ آمیز آلکالین فسفاتاز شناسایی شدند و بیان مارکرهای پرتوانی در سطح پروتئین بوسیله ایمنوفلورسنس، فلوسایتومتری و در سطح ترانسکریپت بوسیله PCR شناسایی شد.ثبات ژنومیک رده سلولی بوسیله کاریوتیپ G-band چک شد. توانایی تمایز به اندودرم، مزودرم و اکتودرم در آزمایشگاه بوسیله رنگ آمیزی ایمنوفلورسنس اثبات شد.
Stem Cell Res. 2017 Jan;18:60-63. doi: 10.1016/j.scr.2016.12.015. Epub 2016 Dec 9.
Generation and characterization of human iPSC line from CD34+ cells isolated from umbilical cord blood belonging to Indian origin.
Fernandes S1, Talwadekar M1, Agarwal R2, Nair V3, Kale V1, Limaye L4.
Abstract
We describe here the reprogramming of CD34+ cells isolated from umbilical cord blood obtained after full term delivery of a healthy female child of Indian origin. The cells were nucleofected by episomal vectors expressing Oct4, Sox2, L-Myc, Klf4, Lin28 and p53DD (negative mutation in p53). Colonies were identified by alkaline phosphatase staining and characterized for expression of pluripotency markers at protein level by immunofluorescence, flow cytometry and at transcript level by PCR. Genomic stability of the cell line was checked by G-banded karyotype. The ability to differentiate to endoderm, mesoderm and ectoderm in vitro was confirmed by immunofluorescence staining.
PMID: 28395807