بیان پروتئین های خاص انسانی در بافت کبدی بزهای کایمریک پیوند شده با سلول های بنیادی خون ساز انسانی
تاریخ انتشار: جمعه 22 دی 1396
| امتیاز:
هدف:
بررسی بیان پروتئین های خاص انسانی در بافت کبدی بدست آمده از بزهای پیوند شده با سلول های بنیادی خون ساز انسانی(hHSC)
روش ها:
سلول های بنیادی خون ساز انسانی مشتق از خون بند ناف برای تولید کایمریسم به جنین های بز پیوند شد. نمونه های کبدی از چهار بز کایمریک 10 ماهه بدست آمد و برای واکنش پذیری شان با آنتی بادی های منوکلونال علیه آنتی ژن های انسانی ارزیابی شدند: آنتی ژن هسته سلول در حال تکثیر(PCNA) و آنتی ژن خاص هپاتوسیتی(HSA). حضور سلول های مثبت برای HSA انسانی در بافت کبد بز بوسیله FACS تعیین شد. بیان mRNAی فاکتور هسته ای هپاتوسیت انسانی(hHNF-3beta) و آلبومین سروم انسانی(hALB) بوسیله RT-PCR تعیین شد. در همین حال، آزمایش های FISH نیز برای تشخیص سلول های انسانی در کبدهای کایمریک بوسیله پروب p17H8 انسان تشخیص داده شد.
نتایج:
پیوند موفقیت آمیز بوسیله تشخیص کایمریسم سلول خونی انسانی در جریان خون بزهای پیوند شده ثابت شد. در نمونه های کبدی بزهای پیوند شده، PCNAو HSA مشاهده شد ولی در مورد بزهای طبیعی این گونه نبود. آنالیزهای FACS حضور سلول های HSA مثبت را در کبد بزهای کایمریک نشان داد. نتایج RT-PCR نشان داد کهmRNAی hHNF-3beta و hALB به طور اختصاصی بوسیله بافت کبدی بزهای کایمریک بیان می شوند. آزمایش FISH دو سیگنال هیبرید مثبت را در برخی سلول های کبدی بزهای کایمریک نشان داد که مبین وجود سلول های شبه کبدی انسانی در آن جا است.
جمع بندی:
بزهای پیوند شده با hHSC قادر به تولید کبدهای کایمریک هستند. رشد و آماده سازی سلول های انسانی در بافت کبدی چنین بزهای پیوند شده ای مقدور است. بویژه، سلول های شبه کبدی انسانی در کبدهای بزهای کایمریک فعالیت رونویسی خاص هپاتوسیت های انسانی داشت.
Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2002 Jul;82(13):894-8.
[The expression of human specific proteins in liver tissue of chimeric goats engrafted with human hematopoitic stem cells].
[Article in Chinese]
Huang S1, Yam H, Pang C, Chen M, Gong Z, Zeng F, Ling S, Zeng Y.
Abstract
OBJECTIVE:
To investigate the expression of human specific proteins in liver tissue obtained from goats engrafted with human hematopoietic stem cells (hHSC).
METHODS:
hHSCs derived from cord blood were transplanted into fetal goats for production of chimerism. Liver specimens were obtained from four 10-month-old chimeric goats and examined for their reactivity with monoclonal antibodies against human antigens: proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and hepatocyte specific antigen (HSA). The presence of human HSA positive cells in the goat liver tissue was determined by fluorescence assisted cell sorting (FACS). The expression of human hepatocyte nuclear factor (hHNF-3beta) and human serum albumin (hALB) mRNAs was determined by RT-PCR. Meanwhile, FISH experiment was also performed to detect the human cells in the chimeric livers with the probe of human p17H8.
RESULTS:
Successful engraftment was confirmed by the detection of human blood cell chimerism in the circulation of the transplanted goats. Human PCNA and HSA were found in liver specimens of transplanted goats but not of normals. FACS analysis showed the presence of human HSA positive cells in the liver of chimeric goats. RT-PCR results demonstrated that hHNF-3beta and hALB mRNAs were specifically expressed in liver tissues of chimeric goats. FISH experiment showed two positive hybridized signals in some liver cells of the chimeric goats, indicating that human liver-like cells were present there.
CONCLUSION:
Goats engrafted with hHSC are capable to produce chimeric livers. Growth and propagation of human cells in the liver tissue of such transplanted goats were possible. Particularly, the human liver-like cells in chimeric goat livers had transcriptional activity specific to human hepatocytes.
PMID: 12126514