به منظور ارزیابی سه روش القای تمایز به سلول های میوسیت، سلول های بنیادی مزانشیمی خون بند ناف (UCMSCs) سگ های باردار (اواخر دوره بارداری)  جداسازی و کشت داده شدند. پاساژ چهارم UCMSCها برای شناسایی آنتی ژن های سطحی شامل CD11a، CD11b، CD29، CD34 و CD71 مورد استفاده قرار گرفت. سلول ها با ماده 5-آزا سیتیدین (5-aza)، عصاره میوکاردیال و مایع القایی میوکاردیال القا شدند. بیان مثبت Nkx2.5، آلفا-اکتین، دسمین، β-MHC و تروپونین I (TNI) پس از سه هفته شناسایی گردید. نتایج ایمونوهیستوشیمی به این صورت بود: CD11a (-)، CD11b(-)، CD34(-)، CD29(+) و CD71(+). بیان Nkx2.5 در گروه 5-aza، گروه عصاره میوکاردیال و گروه مایع القایی میوکاردیال دیده شد. آنالیزهای نیمه کمی نشان دادند که بیان nkx2.5 به طور قابل توجهی در گروه عصاره میوکاردیال بالاتر از گروه 5-aza یا گروه مایع القایی میوکاردیال بود. اما تفاوت قابل ملاحظه ای بین گروه 5-aza و گروه مایع القایی میوکاردیال از نظر بیان nkx2.5 وجود نداشت. MSCها تا قبل از تمایز، پروتئین های ساختمانی میوکاردیال را بیان نمی کردند اما پس از تمایز، آلفا-اکتین، دسمین و β-MHC و تروپونین-I مشاهده شدند. تفاوت در بیان مثبت 4 پروتئین در شرایط تمایزی مختلف وجود داشت. UCMSCها می توانند به سه روش به سلول های میوسیت تمایز یابند اما درجه و میزان تمایز بین آنها ثابت نیست. نتایج ما نشان می دهند که اثرات 5-aza و عصاره میوکاردیال بهتر از اثرات مایع القایی میوکاردیال می باشند.   

Myocardial structural protein expression in umbilical cord blood mesenchymal stem cells after myogenic induction.

Ma N, Ding F, Zhang J, Bao C, Zhong H, Mei J.

Source

Department of Cardio-Thoracic Surgery, Xinhua Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai, 200092, P. R. China.

Abstract

To assess the effects of 3 methods of inducing myogenic cells differentiation, umbilical blood mesenchymal stem cells (UCMSCs) from nearly full-term pregnancy mongrel dogs were purified and cultured. Fourth-passage UCMSCs were used to detect surface antigens, including CD11a, CD11b, CD29, CD34 and CD71 The cells were induced by 5-azacytidine (5-aza), myocardial lysates and myocardial induced fluid. Positive expression of Nkx2.5, α-actin, desmin, β-MHC and troponin-□(TN□) were detected after 3 weeks. The immunohistochemical results were CD11a (-), CD11b (-), CD34 (-), CD29 (+) and CD71 (+).Nkx2.5 was detected in 5-aza group, myocardial lysates group and myocardial induced fluid group. Semi-quantitative analysis showed Nkx2.5 expression significantly higher in myocardial lysates group than in the 5-aza group or myocardial-induced fluid group (P < 0.05), but there was no significant difference between the 5-aza and myocardial-induced fluid groups for Nkx2.5 expression (P > 0.05). MSCs did not express myocardial structural proteins before differentiation, but α-actin, desmin, β-MHC and Troponin-I were present after differentiation. The positive expression of 4 proteins differed with the differentiation conditions. The UCMSCs can be differentiated into myogenic cells by three methods, but the degrees of differentiation are inconsistent, our results show that the effects of 5-aza and myocardial lysates are better than that of myocardial induced fluid.

PMID:23505133