ارائه پروتکلی برای تمایز سلول های بنیادی پرتوان انسان (hPSCs) به سلول های هماتوپوئیتیکی و تولید سلول های میلوئیدی بالغ از hPSCها از طریق تکثیر و تمایز پروژنیتورهای چندتوان lin^-CD34⁺CD43⁺CD45⁺ مشتق از hPSC. پروتکل از سه مرحله اصلی تشکیل شده است: (1) القای تمایز هماتوپوئیتیکی از طریق کشت توام با سلول های استرومایی OP9 مغز استخوان؛ (2) تکثیر کوتاه مدت پروژنیتورهای میلوئیدی چندتوان با دوز بالایی از فاکتور تحریک کننده کلنی گرانولوسیت-ماکروفاژ؛ (3) تمایز هدفمند پروژنیتورهای میلوئیدی به نوتروفیل ها، ائوزینوفیل ها، سلول های دندریتی، سلول های لانگرهانس، ماکروفاژها و استئوکلاست ها. تولید پروژنیتورهای هماتوپوئیتیکی چندتوان از hPSCها نیازمند 9 سری کشت به علاوه دو سری اضافی برای تکثیر پروژنیتورهای میلوئیدی می باشد. تمایز پروژنیتورهای میلوئیدی به سلول های میلوئیدی بالغ، بسته به نوع سلول، نیازمند 5 الی 9  کشت اضافی سلول ها با سیتوکین ها می باشد.  

Hematopoietic differentiation

Authors

Choi KD, Vodyanik M, Slukvin II.

Source

StemBook [Internet]. Cambridge (MA): Harvard Stem Cell Institute; 2008-.
2012 Jun 10.

Excerpt

A protocol for hematopoietic differentiation of human pluripotent stem cells (hPSCs) and generation of mature myeloid cells from hPSCs through expansion and differentiation of hPSC-derived lin⁻CD34⁺CD43⁺CD45⁺ multipotent progenitors. The protocol comprises three major steps: (i) induction of hematopoietic differentiation by coculture of hPSCs with OP9 bone marrow stromal cells; (ii) short-term expansion of multipotent myeloid progenitors with a high dose of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor; and (iii) directed differentiation of myeloid progenitors into neutrophils, eosinophils, dendritic cells, Langerhans cells, macrophages and osteoclasts. The generation of multipotent hematopoietic progenitors from hPSCs requires 9 d of culture and an additional 2 d to expand myeloid progenitors. Differentiation of myeloid progenitors into mature myeloid cells requires an additional 5–19 d of culture with cytokines, depending on the cell type.

PMID:23658971