غربالگری RT-PCR مارکرهای CD73، CD90، CD105 و کادهرین-11 برای سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت های بند ناف انسانی فریز شده
تاریخ انتشار: دوشنبه 14 خرداد 1397
| امتیاز:
پیشینه و اهداف:
سلول های بنیادی مزانشیمی(MSCs)، سلول های خودنوزایی کننده و تخصص نیافته هستند که به طور بالینی برای بازسازی بافت استفاده می شوند و از منابعی مانند مغز استخوان، خون محیطی، خون بند ناف و بافت بند ناف(UCT) تامین می شود. برای نشان دادن یک روش جایگزین برای تشخیص MSCها، بافت بند ناف فریز شده(حفاظت انجمادی شده) و سلول های بنیادی مزانشیمی تکثیر شده با استفاده از RT-PCR برای مارکرهای سلول های بنیادی مزانشیمی CD73، CD90، CD105 و کادهرین-11 غربالگری شدند.
مواد و روش ها:
بافت بند ناف انسانی شسته شده، برش زده شد و با استفاده از DMSO ده درصد حفاظت انجمادی شده و در فاز بخار نیتروژن مایع ذخیره شد. نمونه های بافت بند ناف تازه و فریز شده برای سلول های بنیادی مزانشیمی تکثیر شدند. بافت بند ناف و سلول های بنیادی مزانشیمی برای RNAفرآوری شده و با استفاده از RT-PCR برای mRNAی CD73، CD90، CD105 و کادهرین-11غربالگری شدند. مارکرهای CD73، CD90 و CD105 بوسیله فلوسایتومتری تشخیص داده شدند و کادهرین -11 بوسیله وسترن بلات تشخیص داده شد. بافت بند ناف فریز شده برای کوتاه مدت و بلند مدت بیان از دست رفته CD73 در33.2±34.0% ، CD90 در6.2±8.2% ،CD105 در 17.7±21.6% و کادهرین 11 در 30.1±26.7% را نشان داد اما از نظر آماری برای نشان دادن تخریب معنی دار نبود. سلول های بنیادی مزانشیمی تکثیر شده از بافت بند ناف تازه CD73را0.09±0.07 برابر، CD90 را 0.17±0.11برابر، CD105 را0.04±0.06 برابر و کادهرین 11 را 0.14±0.08برابر بیان کردند. سلول های بنیادی مزانشیمی تکثیر شده از بافت بند ناف فریز شده CD73 را 0.09±0.06برابر، CD90 را 0.13±0.06برابر، CD105 را 0.04±0.05برابر و کادهرین 11 را0.11±0.06 برابر بیان کردند که بوسیله فلوسایتومتری و وسترن بلات ثابت شد.
جمع بندی:
مارکرهای CD73، CD90، CD105 و کادهرین-11 بوسیله RT-PCR در بافت بند ناف فریز شده و سلول های بنیادی مزانشیمی تشخیص داده شدند. به نظر می رسد که کادهرین 11 یک تک مارکر مزانشیمی هدف مناسب برای غربالگری سریع باشد.
Int J Stem Cells. 2018 May 30;11(1):26-38. doi: 10.15283/ijsc17015.
CD73, CD90, CD105 and Cadherin-11 RT-PCR Screening for Mesenchymal Stem Cells from Cryopreserved Human Cord Tissue.
Pham H1,2,3, Tonai R1, Wu M4, Birtolo C5, Chen M1.
Abstract
Background and Objectives:
Mesenchymal stem cells (MSCs) are self-renewing, non-specialized cells used clinically in tissue regeneration and sourced from bone marrow, peripheral blood, umbilical cord blood and umbilical cord tissue (UCT). To demonstrate an alternative method for MSC detection, cryopreserved UCT and expanded MSC were screened for MSC markers CD73, CD90, CD105 and CDH-11 by RT-PCR.
Methods and Results:
Human UCT were washed, sectioned, cryopreserved with 10% DMSO and stored in the vapor phase of liquid nitrogen. Fresh and frozen UCT samples were expanded for MSC. UCT and MSC were processed for RNA and screened for CD73, CD90, CD105 and CDH-11 mRNA by RT-PCR. CD73, CD90 and CD105 were detected by flow cytometry and CDH-11 was detected by Western blotting. Short and long-term frozen UCT shows a loss of mRNA expression for CD73 at 33.2±34.0%, CD90 at 6.2±8.2%, CD105 at 17.7±21.6% and CDH-11 at 30.1±26.7% but was not statistically significant to indicate the deterioration. Expanded MSCs from fresh UCT expressed 0.09±0.07-fold CD73, 0.17±0.11-fold CD90, 0.04±0.06-fold CD105 and 0.14±0.08-fold CDH-11. Expanded MSCs from frozen UCTs expressed 0.09±0.06-fold CD73, 0.13±0.06-fold CD90, 0.04±0.05-fold CD105 and 0.11±0.06-fold CDH-11 and confirmed by flow cytometry and Western blotting.
Conclusion:
CD73, CD90, CD105 and CDH-11 were detected by RT-PCR in cryopreserved UCT and MSC expansion. CDH-11 appears as a useful single target MSC marker for quick screening.
PMID: 29843192