تمایز آزمایشگاهی سلول های عصبی از سلول های استرومایی مشتق از بافت چربی انسانی
تاریخ انتشار: دوشنبه 14 خرداد 1397
| امتیاز:
پیشینه:
سلول های بنیادی از جمله سلول های بنیادی عصبی(NSCs)، با قابلیت خود نوزایی شان شناخته می شوند و بنابراین فرصت بزرگی را برای استفاده از آن ها در درمان های جایگزینی یا محافظتی ایجاد می کنند. ما روشی را برای تولید آزمایشگاهی سلول های استرومایی از بافت چربی انسانی و تمایز آن ها به سلول های عصبی پیشنهاد می کنیم.
مواد و روش ها:
ده گرم بافت چربی اهدایی با استفاده از جراحی از دیواره شکمی اهدا کننده گان انسانی که فرم موافقت نامه را پر کرده بودند، برداشته شد. بافت چربی برداشته شده شست و شو داده شده و به مدت یک ساعت در معرض آنزیم کلاژناز نوع یک در دمای 37 درجه قرار گرفته و در ادامه سانتریفوژ شد. بعد از سانتریفوژ کردن، محیط رویی و پلت های سلولی جدا سازی شده و در محیط کشت برای تکثیر در دمای 37 درجه سانتیگراد، 5 درصد CO2 برای 9 تا 10 روز در ظروف کشت بافت جداگانه و برای تولید سلول های استرومایی مزانشیمی کشت داده شدند. در انتهای کشت، سلول های بنیادی مزانشیمی برداشته شده و مورد آنالیز قرار گرفتند. سلول های بنیادی مزانشیمی بدست آمده برای تمایز به سلول های عصبی برای 5 تا 7 روز در معرض محیط تمایز حاوی محیط نوروبازال قرار گرفتند. در انتهای روش، سلول های کشت شده جداسازی شده و برای بیان پروتئین های فاکتور رونویسی: OTX-2، β3-Tubulin ،GFAP و سیناپتوفیزین β2مورد مطالعه قرار گرفتند.
نتایج:
در مجموع، 50 رده سلول عصبی تولید شد. میانگین کوآنتوم سلول های عصبی تمایز یافته از سلول های بنیادی مزانشیمی تولید شده در آزمایشگاه 5.4 ± 6.9 ml با میانگین سلولی5.27 ± 2.65 × 103/μl بود. همه آن ها وجود OTX-2، β3-Tubulin ،GFAP و سیناپتوفیزین β2 را نشان دادند.
جمع بندی:
سلول های عصبی می توانند در آزمایشگاه به طور بی خطر و موثر از سلول های بنیادی مزانشیمی تمایز یابند. سلول های عصبی تولید شده در آزمایشگاه یک درمان بالقوه را برای ریکاوری آسیب های طناب نخاعی و بیماری مخرب عصبی ارائه می کنند.
Neurol India. 2018 May-Jun;66(3):716-721. doi: 10.4103/0028-3886.232326.
In vitro differentiation of neural cells from human adipose tissue derived stromal cells.
Dave SD1, Patel CN1, Vanikar AV2, Trivedi HL3.
Abstract
Background:
Stem cells, including neural stem cells (NSCs), are endowed with self-renewal capability and hence hold great opportunity for the institution of replacement/protective therapy. We propose a method for in vitro generation of stromal cells from human adipose tissue and their differentiation into neural cells.
Materials and Methods:
Ten grams of donor adipose tissue was surgically resected from the abdominal wall of the human donor after the participants' informed consents. The resected adipose tissue was minced and incubated for 1 hour in the presence of an enzyme (collagenase-type I) at 370C followed by its centrifugation. After centrifugation, the supernatant and pellets were separated and cultured in a medium for proliferation at 370C with 5% CO2 for 9-10 days in separate tissue culture dishes for generation of mesenchymal stromal cells (MSC). At the end of the culture, MSC were harvested and analyzed. The harvested MSC were subjected for further culture for their differentiation into neural cells for 5-7 days using differentiation medium mainly comprising of neurobasal medium. At the end of the procedure, culture cells were isolated and studied for expression of transcriptional factor proteins: orthodenticle homolog-2 (OTX-2), beta-III-tubulin (β3-Tubulin), glial-fibrillary acid protein (GFAP) and synaptophysin-β2.
Results:
In total, 50 neural cells-lines were generated. In vitro generated MSC differentiated neural cells' mean quantum was 5.4 ± 6.9 ml with the mean cell count being, 5.27 ± 2.65 × 103/μl. All of them showed the presence of OTX-2, β3-Tubulin, GFAP, synaptophysin-β2.
Conclusion:
Neural cells can be differentiated in vitro from MSC safely and effectively. In vitro generated neural cells represent a potential therapy for recovery from spinal cord injuries and neurodegenerative disease.
PMID: 29766931