خون بند ناف منبع مهمی از سلول های بنیادی است. با این حال، جداسازی سلولهای استرومایی مزانشیمی چندتوان (MSC) ازخون بند ناف با چالشهای فرایندی روبروست. ما تاثیر شش روش را بر بهبود میزان موفقیت جداسازی و تکثیر سلولهای بنیادی مزانشیمی از خون بند ناف با هم مقایسه کردیم.
در این مطالعه سی واحد خون بند ناف تحت بررسی قرار گرفت. در 10 نمونه، سلولهای تک هسته ای جدا شده از هر نمونه به چهار گروه برای آزمایش اثر حذف سیستم ایمنی منفی (NI) به تنهایی (گروه A) ، NI به همراه فاکتور رشد فیبروبلاستی (bFGF) به عنوان مکمل (گروه B)، مکمل bFGF به تنهایی (گروه C) و کشت بدون NI و bFGF (گروه D) تقسیم شدند. سلول های هر گروه از 10میلی لیترخون بند ناف جدا شدند. برای بررسی اثر حجم نمونه (گروه E) و کیت تکثیر MesenCult (گروه F)، سلول از 2 ± 45 میلی لیترجدا شدند. سلولهای بنیادی مزانشیمی بر اساس مورفولوژیکی، فلوسایتومتری و خصوصیات بالقوه تمایزی شناسایی شدند.
نتایج نشان داد که در گروه A-D، یک هفته پس از کشت اولیه، سلول ها ظاهر گردیدند و در هفته چهارم، بسیاری از آنها مردند. سلولهای مزانشیمی در 40٪ از نمونه ها ی گروه F دیده شد، و تعداد این سلولها در کشت های انجام شده با MesenCult (گروه F) به 60٪ افزایش یافت. این سلول های فیبروبلاست مانند به سرعت تکثیر شده و ویژگی های سلول های بنیادی را نشان دادند.
در مجموع می توان نتیجه گیری کرد که حجم نمونه پارامتری است که بیشترین اثر را در عملکرد جداسازی سلول های بنیادی از خون بند ناف دارد و این می تواند با افزودن کیت تکثیر MesenCult افزایش بیشتری یابد.
Hematol Oncol Stem Cell Ther. 2013 Mar;6(1):1-8. doi: 10.1016/j.hemonc.2013.02.002. Epub 2013 Feb 28.
Parameters that influence the isolation of multipotent mesenchymal stromal cells from human umbilical cord blood.
Vasaghi A, Dehghani A, Khademalhosseini Z, Khosravi Maharlooei M, Monabati A, Attar A.
Source
Student Research Committee, Shiraz University of Medical Sciences (SUMS), Shiraz, Iran.
Abstract
BACKGROUND AND OBJECTIVES:
Umbilical cord blood is an important source of stem cells. However, isolating multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs) from umbilical cord blood presents methodological challenges. We compared the effectiveness of six approaches to improve the success rate of MSC isolation and proliferation from umbilical cord blood.
METHODS:
Thirty umbilical cord blood units underwent investigation. In 10 samples, MNCs from each sample were divided into four groups to test the effect of negative immunodepletion (NI) alone (group A); NI plus basic fibroblastic growth factor (bFGF) supplementation together (group B); bFGF supplementation alone (group C); and culture with neither NI nor bFGF (group D). The cells of each group were isolated from 10mL of umbilical cord blood. For investigating the effect of sample volume (group E) and MesenCult Proliferation Kits (group F), cells were isolated from 45±2ml. MSCs were identified on the basis of morphological, flow cytometric and differentiation potential characteristics.
RESULTS:
In groups of A-D, one week after the initial seeding, the cells showed a rounded appearance, and in the fourth week, many of them died. MSCs outgrowth was seen in 40% of the samples from group F, and this yield was further enhanced to 60% in cultures done with the MesenCult Proliferation Kit (group F). The fibroblast-like cells expanded rapidly and showed features of MSCs.
CONCLUSION:
Sample volume was the parameter that showed the greatest influence on the isolation yield of MSCs from umbilical cord blood. This could be further enhanced by adding the MesenCult Proliferation Kit.
Copyright © 2013 King Faisal Specialist Hospital & Research Centre. Published by Elsevier B.V. All rights reserved.
PMID:23664598