جداسازی سلولهای استرومایی مزانشیمی چند توان مشتق ازبافت چربی با استفاده از محیط فاقد سرم
سابقه و هدف:
در حال حاضر سلول های استرومایی مزانشیمی ( MSC ) به عنوان سلول های چندتوان با توانایی تمایز به چندین رده سلولی، منابع امیدوارکننده ای برای سلول درمانی و مهندسی بافت می باشند. امروزه بسیاری از محیط های کشت ، حاوی سرم جنین گاو (FBS) هستند. اما محیط کشت حاوی FBS ممکن است احتمال عفونت های مشترک انسان و دام و واکنش های ایمونولوژیک را درشرایط سلول درمانی بالا ببرد . تحقیقات متعددی برای ارزیابی استفاده از سیستم های کشت فاقد FBS برای جداسازی سلول استروما مزانشیمی ازمغز استخوان انجام شده است.
هدف:
پژوهش حاضر با هدف بررسی اثر محیط فاقد سرم در رشد و توانایی تمایز سلول های بنیادی مشتق از بافت چربی انجام شده است.
مواد و روش ها :
حدود 1سانتی متر مکعب بافت چربی استریل جدا شده با جراحی با استفاده ازکلاژناز نوع 1 هضم شده و به یک سوسپانسیون تک سلولی تبدیل شد. سلول های جدا شده درمحیط کشت حاوی 2 ٪ Ultroser G (نوعی جایگزین سرمی) کشت داده شد. سلول های بنیادی مزانشیمی از نظر مورفولوژی، فلوسیتومتری ، تمایز به بافت چربی و استخوان مورد بررسی قرار گرفت .
نتایج :
سلولهای جدا شده ،مورفولوژی دوکی شکل وچسبنده را نشان داده، به سرعت تکثیر یافته و ویژگی های فلوسیتومتری مورد انتظارازMSC را نشان دادند. آنها از نظر بیان مارکرهای CD73 ، CD105 ، CD44 ، CD166 ، CD90،CD44 مثبت و برای آنتی ژن های خونساز مانند CD45 ، CD34 و CD14 ، منفی بودند. آنها همچنین توانستد با موفقیت به رده های استخوانی و چربی تمایز یافته که به ترتیب با استفاده از رنگ آمیزی آلیزارین رد و اویل رد تایید شد.
نتیجه گیری:
با توجه به نتایج مطالعه حاضر، می توان نتیجه گرفت که سلول های بنیادی مشتق ازچربی را می توان در محیط های فاقد سرم بدون هیچ تغییردر توانایی تمایزی آنها کشت داد. این یافته ها به ما امید هایی را برای مطالعات سلول درمانی در آینده ه با کاهش نگرانی در مورد انتقال عفونت های مشترک انسان و دام و یا واکنش ایمنی می دهد.
Iran Red Crescent Med J. 2013 Apr;15(4):324-329. Epub 2013 Apr 5.
Adipose Tissue Derived Multipotent Mesenchymal Stromal Cells Can Be Isolated Using Serum-free Media.
Ahrari I, Purhabibi Zarandi N, Khosravi Maharlooei M, Monabati A, Attari A, Ahrari S.
Source
Student Research Committee, Shiraz University of Medical Sciences (SUMS), Shiraz, IR Iran.
Abstract
BACKGROUND:
Mesenchymal stromal cells (MSCs) as multipotent cells with the capacity to be differentiated into several cell lineages are promising sources for cell therapy and tissue engineering nowadays. Today most of culturing media are supplemented with fetal bovine serum (FBS). But FBS containing culturing media may raise the possibility of zoonotic infections and immunological reactions in cell therapy conditions. Numerous investigations have been performed to assess the use of FBS-free culturing systems for bone marrow derived mesenchymal stromal cell isolation.
OBJECTIVES:
The present investigation aimed to assess the effect of serum-free media on growth and differentiating capacity of adipose tissue- derived MSCs.
MATERIALS AND METHODS:
Approximately, 1cm3 surgically waste sterile adipose tissue was digested with collagenase-I leading to a single cell suspension. The isolated cells were cultured in Ultra Culture media supplemented with 2% Ultroser G. MSC's isolation was confirmed with respect to morphology, flowcytometry, adipogenic and osteogenic differentiation potentials.
RESULTS:
The isolated cells showed adherent spindle shaped morphology, expanded rapidly and revealed expected MSC flowcytometric characteristics; they were positive for CD73, CD90, CD105, CD44, CD166, CD44 and negative for hematopoietic antigen such as CD45, CD34 and CD14. They could also be differentiated successfully into osteoblast and adipocyte, being confirmed by using Alizarin Red and Oil red O staining, respectively.
CONCLUSIONS:
According to the results of the present study, it can be concluded that adipose derived MSCs can be cultured in serum-free media with no change in their differentiating capacity. This finding gives us a hope for future cell therapy studies and trials with little concern about zoonotic infections or immunological reaction.
KEYWORDS:
Cariel, Culture Medium, Cell Therapy, Mesenchymal Stem Cells
PMID: 24083007