تولید  یک آنتی بادی نوترکیب ویژه برای آنتی ژن گروه خونی i ، یک مارکر سلول های بنیادی مزانشیمی
سلول های بنیادی / استرومایی چندتوان مزانشیمی (MSC) ، امیدهای زیادی را برای آینده درمان های ترمیمی و ضد التهابی ایجاد کرده اند . در حال حاضر از پانل هایی از مارکرهای عملکردی و فنوتیپی  برای تعیین ویژگی جمعیت های  درمانی سلول های بنیادی مختلف از منابع متفاوت استفاده می شود.  آنتی ژن i (پلی –N استیل لاکتوزآمین  خطی) از سیستم گروه خونی نوع دوم، به عنوان یک مارکر سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از خون بند ناف ( UCB ) پیشنهاد شده است. ولی در حال حاضر هیچ آنتی بادی تجاری برای شناسایی آنتی ژن i وجود ندارد. درمطالعه حاضر، ما استفاده از فن آوری antibody phage display  را برای تولید آنتی بادی های نوترکیب شناسایی کننده یک ترکیب درسطح سلول های بنیادی مزانشیمی توصیف می کنیم.  ما کتابخانه ای  ازIgM phage display  را از لنفوسیت های یک دهنده با افزایش آنتی تیتر i سرم ایجاد کردیم. فن آوری antibody phage display  به ایمن سازی وابسته نیست  و در نتیجه اجازه تولید آنتی بادی در برابر مولکول های ضعیف سیستم ایمنی مثل کربوهیدرات ها را می دهد. سنجش آگلوتیناسیون با استفاده از سلول های قرمز خون آنتی ژن i مثبت          ( گلبولهای قرمز) به دست آمده از UCB ، شش آنتی بادی با قطعه متغیر تک زنجیره ای ( scFv ) را نشان داد که سه تا از آنها اپی توپ سطح UCB -MSC را در جریان فلوسیتومتری نشان دادند. توالی اسید آمینه بخش ژن Vh قطعه  B12.2 scFv بسیار شبیه به بخش ژن Vh4.21 مورد نیاز برای رمزگذاری ویژگی های آنتی i بود. تعیین ویژگی بیشترخصوصیات اتصال نشان داد که اتصال هیپرفاژ    B12.2  بوسیله الیگوساکارید لاکتوزآمین خطی محلول مهار می شود. بر اساس این یافته ها ، ما پیشنهاد می کنیم  B12.2 scFv  که ما تولید کردیم یک آنتی بادی برجسته  آنتی   iاست که آنتی ژن i  را در سطح هر دو سلول UCB -MSC و گلبول قرمز شناسایی می کند . این اتصال در نتیجه می تواند در تشخیص و جداسازی UCB - MSC  و همچنین در سرولوژی گروه خون مورد استفاده قرار گیرد.

Biores Open Access. 2013 Oct;2(5):336-345.

Production of a Recombinant Antibody Specific for i Blood Group Antigen, a Mesenchymal Stem Cell Marker.

Hirvonen T, Suila H, Tiitinen S, Natunen S, Laukkanen ML, Kotovuori A, Reinman M, Satomaa T, Alfthan K, Laitinen S, Takkinen K, Räbinä J, Valmu L.

Source

Finnish Red Cross Blood Service , Helsinki, Finland .

Abstract

Multipotent mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) offer great promise for future regenerative and anti-inflammatory therapies. Panels of functional and phenotypical markers are currently used in characterization of different therapeutic stem cell populations from various sources. The i antigen (linear poly-N-acetyllactosamine) from the Ii blood group system has been suggested as a marker for MSCs derived from umbilical cord blood (UCB). However, there are currently no commercially available antibodies recognizing the i antigen. In the present study, we describe the use of antibody phage display technology to produce recombinant antibodies recognizing a structure from the surface of mesenchymal stem cells. We constructed IgM phage display libraries from the lymphocytes of a donor with an elevated serum anti-i titer. Antibody phage display technology is not dependent on immunization and thus allows the generation of antibodies against poorly immunogenic molecules, such as carbohydrates. Agglutination assays utilizing i antigen-positive red blood cells (RBCs) from UCB revealed six promising single-chain variable fragment (scFv) antibodies, three of which recognized epitopes from the surface of UCB-MSCs in flow cytometric assays. The amino acid sequence of the V_H gene segment of B12.2 scFv was highly similar to the V_H4.21 gene segment required to encode anti-i specificities. Further characterization of binding properties revealed that the binding of B12.2 hyper phage was inhibited by soluble linear lactosamine oligosaccharide. Based on these findings, we suggest that the B12.2 scFv we have generated is a prominent anti-i antibody that recognizes i antigen on the surface of both UCB-MSCs and RBCs. This binder can thus be utilized in UCB-MSC detection and isolation as well as in blood group serology.

PMID: 24083089