تکثیرآزمایشگاهی سلول های بنیادی / پیش ساز خونسازخون بندناف انسان توسط هم کشتی با سلول های hkirre - AFT024

ژن Kiaa1867 ( Kirre انسان، hKirre ) نقش مهمی در تکوین مغزی و یا حفظ دیافراگم شکاف گلومرولی در کلیه ها دارد. هومولوگ موشی این ژن ، mKirre که در سلول های OP9 و AFT024 بیان می شود می تواند ازتکثیر سلول های بنیادی / پیش سازخونساز ( HSC / HPC) در شرایط آزمایشگاهی حمایت کند. HKirre همچنین دررده سلولی  hTERT - FBMOB انسان و سلولهای شبه فیبروبلاستی کبد جنین بیان می شود اما عملکرد آن هنوز واضح نیست. دراین مقاله ، ما یک ژن hKirre را از سلولهای فیبروبلاستی کبد جنین انسان شبیه سازی کرده و دودمان سلولی پایداری را با بیان بالای ژن -hKirre  AFT024  ایجاد کردیم. سلول های حاصل می تواند خود تجدیدی و تکثیرآزمایشگاهی سلول های بنیادی / پیش سازخونساز را به طور قابل توجهی نسبت به سلول های AFT024  گروه کنترل حاوی پلاسمید ساختگی افزایش دهد. تکثیر سلول های + CD34خون بند ناف انسانhUCB )) ظرفیت تمایزی چندتوان را به مدت 8 هفته حفظ کرده و با موفقیت سبب بازسازی جمعیت مغزاستخوان موش های NOD / SCID تحت تابش کشنده شدند که نشان دهنده تکثیر بلند مدت سلول های بنیادی / پیش سازخونساز ابتدایی پیوند شده است. نکته مهم اینکه hkirre توانست بیان Wnt -5A ، BMP4 وSDF- 1  را افزایش و بیان β-TGF با سایر فاکتورهای رشد خونسازرا کاهش دهد. بوسیله آنالیز SDS -PAGE و وسترن بلات ، یک پروتئين  89 کیلو دالتون درعصاره AFT024 - hKirre شناسایی شد. محلول رویی AFT024 - hkirre همچنین می تواند از تکثیرسلول های ( -) CD38 ( + ) CD34 پشتیبانی کند. این نتایج نشان داد که سلول های AFT024 - hKirre دارای توانایی بالایی در تکثیر سلول های بنیادی / پیش سازخونساز می باشند.

Biomed Res Int. 2014;2014:412075. doi: 10.1155/2014/412075. Epub 2014 Feb 25.

Ex Vivo Expansion of Functional Human UCB-HSCs/HPCs by Coculture with AFT024-hkirre Cells.

Khan MU¹, Ali I², Jiao W³, Wang Y³, Masood S⁴, Yousaf MZ⁵, Javaid A⁶, Ahmad S⁷, Feng M³.

Abstract

Kiaa1867 (human Kirre, hKirre) has a critical role in brain development and/or maintenance of the glomerular slit diaphragm in kidneys. Murine homolog of this gene, mKirre expressed in OP9 and AFT024 cells could support hematopoietic stem cells/hematopoietic progenitor cells (HSC/HPC) expansion in vitro. HKirre is also expressed in human FBMOB-hTERT cell line and fetal liver fibroblast-like cells but its function has remained unclear. In this paper, we cloned a hKirre gene from human fetal liver fibroblast-like cells and established a stably overexpressing hKirre-AFT024 cell line. Resultant cells could promote self-renewal and ex vivo expansion of HSCs/HPCs significantly higher than AFT024-control cells transformed with mock plasmid. The Expanded human umbilical cord blood (hUCB) CD34(+) cells retained the capacity of multipotent differentiation as long as 8 weeks and successfully repopulated the bone marrow of sublethally irradiated NOD/SCID mice, which demonstrated the expansion of long-term primitive transplantable HSCs/HPCs. Importantly, hkirre could upregulate the expressions of Wnt-5A, BMP4, and SDF-1 and downregulate TGF- β with other hematopoietic growth factors. By SDS-PAGE and Western Blot analysis, a ~89 kDa protein in total lysate of AFT024-hKirre was identified. Supernatants from AFT024-hkirre could also support CD34(+)CD38(-) cells expansion. These results demonstrated that the AFT024-hKirre cells have the ability to efficiently expand HSCs/HPCs.

PMID: 24719861