جداسازی سلولهای اندوتلیال و پری سیت ها از جسم زرد خوک

از جنبه رگ زایی، تخمدان یک فرصت منحصر به فرد را برای مطالعه تکوین فیزیولوژیکی رگ های خونی ارائه می دهد. هدف اول ازاین مطالعه راه اندازی روشی برای جداسازی سلول های اندوتلیال ازجسم زرد خوک بود که توسط هر دو پارامتر مورفولوژیکی و بیان مارکرهای مولکولی قابل تشخیص بودند. ما همچنین توانایی آنها برای تشکیل ساختار شبه مویرگی در یک ماتریکس 3 بعدی، پاسخ آنها به هیپوکسی و مهاجرت آنها در حضور فاکتور رشد اندوتلیال عروقی (VEGF) را مورد بررسی قرار دادیم. کارایی روش جداسازی ما با ویژگی "شکل سنگ فرشی" سلول های جدا شده و همچنین بیان همه نشانگرهای اندوتلیالی مورد بررسی تایید شد. نتایج  ما همچنین تولید قابل توجهی از VEGF و نیتریک اکسید را توسط این سلول ها نشان داد. سلول های اندوتلیال جدا شده همچنین به کمبود اکسیژن با افزایش بیان و تولید VEGF و کاهش نیتریک اکسید پاسخ دادند. ازجنبه رگزایی، سلولها توانایی تشکیل ساختارهای شبه مویرگی را داشته و همچنین مهاجرت قابل توجهی را نشان دادند. یافته های ما نشان می دهد که جداسازی سلولهای اندوتلیال جسم زرد یک ابزار امیدوار کننده در آزمایش های طراحی شده برای روشن شدن زیست شناسی روند رگ زایی می باشد. علاوه براین، ما نشان دادیم که جمعیت های جدا شده شامل زیر مجموعه ای از سلول ها با ظرفیت چندتمایزی به سمت فنوتیپ غضروف و چربی می باشند. این داده ها نشان می دهد که حضور یک نیچ دورعروقی و یا خارجی در دیواره عروق جسم زرد سبب تجمع سلول هایی با ویژگی های شبه سلول های بنیادی مزانشیمی همانند آنچه که برای بافت چربی و آندومتر ثابت شده، می شوند.

Domest Anim Endocrinol. 2014 Jul;48C:100-109. doi: 10.1016/j.domaniend.2014.02.007. Epub 2014 Mar 12.

Isolation of endothelial cells and pericytes from swine corpus luteum.

Basini G¹, Falasconi I², Bussolati S², Grolli S², Ramoni R², Grasselli F².

Author information

• ¹Dipartimento di Scienze Medico-Veterinarie, Università degli Studi di Parma, Parma, Italy. Electronic address: giuseppina.basini@unipr.it.
• ²Dipartimento di Scienze Medico-Veterinarie, Università degli Studi di Parma, Parma, Italy.

Abstract

From an angiogenesis perspective, the ovary offers a unique opportunity to study the physiological development of blood vessels. The first purpose of this work was to set up a protocol for the isolation of pig corpus luteum endothelial cells, which were characterized by both morphologic parameters and the expression of typical molecular markers; we also verified their ability to form capillary-like structures in a 3-dimensional matrix, their response to hypoxia and their migration in the presence of vascular endothelial growth factor (VEGF). The effectiveness of our isolation protocol was confirmed by the characteristic "cobblestone shape" of isolated cells at confluence as well as their expression of all the examined endothelial markers. Our data also showed a significant cell production of VEGF and nitric oxide. Isolated endothelial cells were also responsive to hypoxia by increasing the expression and production of VEGF and decreasing that of nitric oxide. In the angiogenesis bioassay, cells displayed the ability of forming capillary-like structures and also exhibited a significant migration in the scratch test. Our data suggest that the isolation of luteal endothelial cells represents a promising tool in experiments designed to clarify the biology of the angiogenic process. Furthermore, we have demonstrated that the isolated population comprises a subset of cells with a multidifferentiative capacity toward the chondrocytic and adipocytic phenotypes. These data suggest the presence of a perivascular or adventitial cell niche in the vascular wall of the corpus luteum populated with cells showing mesenchymal stem cell-like features, as already demonstrated for the adipose tissue and endometrium.