روش جدید برای به تصویر کشیدن ترشح پروتئین در سطح تک سلولی
تصویربرداری با وضوح بالا از ترشح پروتئین در سطح تک سلولی با استفاده از سنجش FluoroDOT تقویتشده با پلاسمون امکان پذیر شد.
امتیاز:
به گزارش پایگاه اطلاع رسانی بنیان، بیشتر ما اخیراً شاهد تصاویر خیره کنندهای از کهکشانهای دوردست بودهایم که توسط تلسکوپ جیمز وب فاش شدهاند، که قبلاً فقط به صورت نقاط تار قابل مشاهده بودند. محققان دانشگاه واشنگتن در سنت لوئیس روش جدیدی برای تجسم پروتئینهای ترشح شده توسط سلولها با وضوح خیره کننده ایجاد کردهاند که آن را به نسخه جیمز وب برای تجسم ترشح پروتئین تک سلولی مشهور ساخته است.
محققان روش FluoroDOT را توسعه دادند. نتایج این مطالعه در مجله Cell Reports Methods منتشر شد. این روش بسیار حساس قادر است پروتئینهای ترشح شده توسط یک سلول را در حدود 30 دقیقه ببیند و اندازهگیری کند. با همکاری محققان دانشکده پزشکی دانشگاه واشنگتن و سایر دانشگاهها، آنها دریافتند که سنجش FluoroDOT همه کاره، کمهزینه و سازگار با هر محیط آزمایشگاهی است و این پتانسیل را دارد که نگاه جامعتری به این پروتئینها نسبت به روشهای پرکاربرد موجود ارائه دهد. محققان زیستپزشکی برای به دست آوردن اطلاعاتی در مورد ارتباط سلول به سلول، سیگنالدهی سلولی، فعالسازی و التهاب، از جمله اقدامات دیگر، به این پروتئینهای ترشح شده نگاه میکنند، اما روشهای موجود از نظر حساسیت محدود هستند و ممکن است تا 24 ساعت طول بکشد تا پردازش شوند.
چیزی که سنجش FluoroDOT را از سنجشهای موجود متمایز میکند این است که از یک پلاسمونیک فلور استفاده میکند، یک نانوبرچسب افزایشیافته با پلاسمون که در آزمایشگاه Singamaneni ساخته شده است که 16000 برابر روشنتر از برچسبهای فلورسانس معمولی است و نسبت سیگنال به نویز تقریباً 30 برابر بیشتر است. این انتشار فوقالعاده پلاسمونیک فلور به کاربر امکان میدهد مقادیر بسیار کمی از پروتئین ترشح شده را ببیند، کاری که در سنجشهای موجود قادر به انجام آن نیست و سیگنالهای با وضوح بالا را بهصورت دیجیتالی با استفاده از تعداد ذرات یا الگوی نقطهای در هر خوشه اندازهگیری کند. علاوه بر این، به تجهیزات خاصی نیاز ندارد.
با استفاده از یک میکروسکوپ فلورسانس ساده، دانشمندان توانستند به طور همزمان یک سلول را همراه با توزیع فضایی پروتئینهای ترشح شده در اطراف آن به تصویر بکشند. محققین الگوهای ترشح جالبی را برای انواع مختلف سلول دیدند. این آزمایش همچنین امکان تجسم همزمان دو نوع پروتئین از سلولهای منفرد را فراهم میکند. هنگامی که سلولهای متعدد در معرض محرکهای یکسانی قرار میگیرند، میتوان سلولهایی را که همزمان دو پروتئین ترشح میکنند تشخیص داد.
برای تایید این فناوری، این تیم از پروتئینهای ترشح شده از سلولهای انسان و موش، از جمله سلولهای ایمنی آلوده به مایکوباکتریوم توبرکلوزیس استفاده کردند.
محققین در این مطالعه ابراز داشتند که زمانی که مایکوباکتریوم توبرکلوزیس سلولهای ایمنی را آلوده میکند، آن سلولها با ترشح پروتئینهای ایمنی مهم به نام سیتوکین پاسخ میدهند. اما همه سلولها به یک شکل به عفونت پاسخ نمیدهند. سنجش FluoroDOT به ما این امکان را میدهد که ببینیم سلولهای منفرد در یک جمعیت چگونه به عفونت پاسخ میدهند.
پایان مطلب/