به گزارش پایگاه اطلاع رسانی بنیان، در مطالعه‌ای که اخیراً در ژورنال PLoS Pathogens منتشر شده است، محققان تأثیر چارچوب خواندن باز (ORF)-6  با سندرم حاد تنفسی کرونا 2 (SARS-CoV-2) را بر سیگنال‌های ایمنی ذاتی ارزیابی کردند.
یک بتاکوروناویروس به نام SARS-CoV-2 عامل بیماری ویروسی کشنده کروناویروس 2019 (COVID-19) است. درک بیولوژی مولکولی ویروس و نحوه تعامل آن با سلول میزبان به دلیل تأثیر قابل توجه آن بر سلامت انسان، ضروری است. در مطالعه حاضر، محققان نشان دادند که پروتئین جانبی SARS-CoV-2 ORF6 با صدور ریبونوکلئیک اسید سلولی 1 (Rae1) و جلوگیری از خروج اسید ریبونوکلئیک (mRNA) پیام رسان تعامل دارد.
این تیم ابتدا گروهی از ذرات ویروس مانند ویروس نقص ایمنی انسانی (HIV)-1 (VLPs) ایجاد کردند که هر ORF را برای انتقال انواع خطوط سلولی مختلف و القای بیان هر پروتئین کمکی به طور جداگانه برای بررسی عملکرد SARS کدگذاری می‌کرد. پروتئین‌های جانبی CoV-2 VLP ها زمانی ایجاد شدند که سلول‌های HEK293T با HIV-1 Gag-Pol، VSV-G، و یک وکتور pLVX-StrepII-ORF حاوی ژن‌های ORF3a، ORF3d، ORF6، ORF7a، ORF7b، ORF8، ORF9b، ORF9c یا ORF10 هم ترانسفکت شدند.
همه VLP ها حداقل 104 واحد عفونی در میلی لیتر داشتند که تیتر آن‌ها پس از 72 ساعت ارزیابی شد، به استثنای ORF6 که برای VLP دارای واحدهای عفونی غیرقابل تشخیص رمزگذاری بود. لیزهای سلولی HEK293T ترانسفکت شده با ایمونوبلات پلی پروتئین ساختاری HIV-1، Gag، مورد بررسی قرار گرفتند تا مشخص شود که آیا این امر ناشی از کاهش عفونت یا کاهش تشکیل ذرات است.
همه سلول‌ها، به جز آن‌هایی که با pLVX-StrepII-ORF6 ترانسفکت شده بودند، شواهدی از Gag را نشان دادند. نتایج نشان داد که بیان ORF6  با مهار سنتز Gag از تولید VLPs جلوگیری می‌کند. تنها زمانی که ORF6 در غلظت‌های فزاینده وجود داشت، بیان گاگ به صورت وابسته به دوز کاهش یافت. این تیم تأیید کرد که ORF6 تولید شده از این ناقل به طور قابل توجهی باعث کاهش عفونت ویروسی و بیان Gag می‌شود. اگرچه ایمونوبلات بیان بسیار پایینی از ORF3d، ORF9c  و ORF10 را نشان داد، که دیگران نیز مشاهده کرده‌اند، هیچ یک از ORFهای دیگر تأثیری بر شدت فلورسانس متوسط (MFI) mApple نداشتند. در مجموع، یافته‌های حاضر نشان می‌دهد که ORF6 می‌تواند تولید چندین پروتئین تولید شده توسط یک ناقل را مسدود کند.
این تیم همچنین تأیید کرد که ORF6 تولید شده از این ناقل به طور قابل توجهی عفونی شدن ویروس و بیان Gag را کاهش می‌دهد. علاوه بر این، هنگامی که MFI mApple پس از ترانسفکشن همزمان سلول‌های HEK293T با پلاسمیدهایی که هر یک از SARS-CoV-2 ORF را در وکتور دارای برچسب دوقلو استرپتوکوکی بیان می‌کنند، توسط فلوسایتومتری ارزیابی شد، ORF6  به طور قابل‌توجهی MFI را نسبت به شاهد کاهش داد. اگرچه ایمونوبلات بیان بسیار پایینی از ORF3d، ORF9c  و ORF10 را نشان داد، که دیگران نیز مشاهده کرده‌اند، هیچ یک از ORFهای دیگر تأثیری بر MFI mApple نداشتند. 
سلول‌های تیمار شده با لپتومایسین B (LMB) همچنین نسبت mRNA ژن Nucl: Cyto GFP بیشتری نسبت به سلول‌های تیمار نشده داشتند. سلول‌هایی که ORF6 را بیان می‌کنند به ویژه نسبت mRNA ژن Nucl:Cyto GFP مشابهی با سلول‌های کنترل بیان‌کننده ORF9b داشتند که تنها کاهش جزئی را منعکس می‌کند.
پایان مطلب/