به گزارش پایگاه اطلاع رسانی بنیان، در مطالعه اخیر منتشر شده در Viruses، محققان روش انتقال مستقیم پلاسمید را برای تولید ذرات شبه ویروسی (VLP) با سندرم حاد تنفسی ویروس کرونا 2 (SARS-CoV-2) در سلول‌های حشرات ارائه کردند و از VLPs  برای ارزیابی کارایی مونوکلونال استفاده کردند. محدودیت‌های ایمنی زیستی تحقیقات با ویروس SARS-CoV-2 معتبر را محدود می‌کند و بنابراین، از سیستم‌های شبه ویروس مبتنی بر ویروس لنتی ویروس یا استوماتیت تاولی (VSV) استفاده می‌شود. با این حال، ذرات PV حاصل تنها یکی از پروتئین‌های ساختاری ویروس کووید یعنی پاکت‌(E)، اسپایک (S)، غشاء (M) و نوکلئوکپسید (N)  را بیان می‌کنند. علاوه بر این، تولید PV شامل فرآیندهای پیچیده است و به آزمایشگاه‌های ایمنی زیستی سطح 2 (BSL2) نیاز دارد.
در مطالعه حاضر، محققان  VLPهای مبتنی بر پلاسمید SARS-CoV-2 را در یک سیستم سلولی حشره تولید کردند و از آن‌ها برای سنجش سلولی مبتنی بر پروتئین فلورسنت سبز (GFP) برای غربالگری ساده و سریع ایمنی سرولوژیکی ناشی از mAbs ضد S استفاده کردند. این تیم طرح‌های مختلف وکتور بیانی و نسبت‌های بهینه SARS-CoV-2 M را برای سنجش‌های اتصال سلولی مبتنی بر GFP تجزیه و تحلیل کردند و عملکرد آن‌ها را در سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم مبتنی بر SARS-CoV-2 (ELISA) ارزیابی کردند. پس از آن، کیفیت VLP با میکروسکوپ الکترونی عبوری (TEM)، میکروسکوپ اپی فلورسانس، میکروسکوپ کانفوکال (CFM)، وسترن بلات و آنالیز ردیابی نانو (NTA) برای ارزیابی اتصال و شباهت آنزیم مبدل آنژیوتانسین 2 (ACE2) به SARS-اصیل مورد ارزیابی قرار گرفت. 
ادغام پروتئین M به GFP تعیین کمیت مستقیم مهار اتصال ACE2 توسط mAbs یا سرم افراد واکسینه شده را فعال کرد. همجوشی پروتئین SP و M به طور قابل توجهی سیگنال اتصال VLP را در سنجش الایزا ساندویچ کاهش داد، در حالی که همجوشی SP به پروتئین E باعث افزایش اتصال شد. بردارهای بیان VLP E و S را با SP کدگذاری می‌کنند، در حالی که بیان M فاقد یکی است. ساندویچ ELISA و تجزیه و تحلیل FC تفاوت قابل توجهی در اتصال VLP نشان نمی دهد زمانی که نسبت‌های مختلف S: E: M به جز برای اتصال جزئی برای VLP-6M-Furin استفاده شد. برای سنجش‌های سلولی بعدی، تیم VLP-6M را انتخاب کرد. تجزیه و تحلیل TEM ساختارهای ویروسی مشابه VLP و SARS-CoV-2 را نشان داد. مقدار S روی سطح VLP با وکتور بیانی S مورد استفاده در آزمایش‌های ترانسفکشن همبستگی داشت و منجر به یک هاله S معمولی برای VLPs-1M، 4M، و 6M شد.
تعداد VLP و شدت GFP برای VLP-6M نسبت به VLP-6M-Furin به طور نهایی بالاتر بود و بر اساس بیان ACE2 متفاوت بود. علاوه بر این، آزمایش‌های بهینه‌سازی نشان داد که سنجش‌های اتصال سلولی را می‌توان در عرض یک ساعت بدون از دست دادن سیگنال قابل توجه انجام داد و VLPها را می‌توان در دمای ۸۰- درجه سانتی‌گراد ذخیره کرد. نتایج مهار اتصال موفقیت آمیز VLP-ACE2 را نشان دادند و سنجش VLP منعکس کننده SARS-CoV-2 معتبر بود.
به طور کلی، یافته‌های مطالعه نشان داد که تولید SARS-CoV-2 VLP با استفاده از روش انتقال مستقیم پلاسمید، جایگزین ساده‌تر، سریع‌تر و قابل اعتمادتر برای رویکرد BEVS است.
پایان مطلب/
منبع: